梯度PCR是指你的PCR儀在設置的時(shí)候可以同一時(shí)間不同位置設置一個(gè)從高到低的溫度梯度,以便在不知道退火溫度的情況下選擇一個(gè)最適宜的退火溫度。
二實(shí)時(shí)熒光定量PCR是通過(guò)再PCR過(guò)程中摻入熒光染料或釋放熒光基團,從而對模板進(jìn)行相對定量或絕對定量的實(shí)驗,在實(shí)時(shí)熒光定量PCR時(shí)也可以設置梯度。
總的來(lái)說(shuō)實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種實(shí)驗方法,而梯度PCR是一種實(shí)驗手段。
原理:
1、常規PCR 技術(shù):
對PCR 擴增反應的終點(diǎn)產(chǎn)物進(jìn)行定量和定性分析無(wú)法對起始模板準確定量,無(wú)法對擴增反應實(shí)時(shí)檢測。
2、實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù):
利用熒光信號的變化實(shí)時(shí)檢測PCR擴增反應中每一個(gè)循環(huán)擴增產(chǎn)物量的變化,通過(guò)Ct 值和標準曲線(xiàn)的分析對起始模板進(jìn)行定量分析